西方墨點法 Western Blot
西方墨點 (WB) 是一種基本的免疫分析技術,用於檢測細胞或組織裂解物中的蛋白質表現量。當與免疫沉澱 (IP) 結合時,西方墨點還可以顯示蛋白質於細胞內的位置、轉譯後修飾、蛋白質加工及蛋白質-蛋白質之間的相互作用。
西方墨點 (Western blot, WB) 為利用抗體來識別細胞或組織裂解液中個別蛋白質的一種技術。抗體與高度專一性的胺基酸序列(稱為抗原表位/抗原決定位)結合。由於蛋白質與蛋白質之間的胺基酸序列有所不同,因此西方墨點可用於鑑定與定量含有數千種不同蛋白質裂解物中的單一蛋白質。首先,藉由 SDS-PAGE 凝膠電泳,根據蛋白質的大小將蛋白質彼此分離。接下來,透過施加電流將蛋白質從凝膠轉漬到膜上。然後針對有興趣的目標蛋白,使用特異性之一級抗體對膜進行處理。再接著使用與酵素結合的二抗,最後添加會與二抗結合之酵素反應的受質,以偵測抗體/蛋白質複合物。