FAQ常見問題

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CF 代表無載體 (Carrier-Free) 的蛋白。為了確保穩定性,Bio-techne 於每 1µg 的重組蛋白中加入 50µg 的 BSA,故無載體蛋白型式則表示不含 BSA。通常含 BSA 的蛋白能比無載體的蛋白以更低的濃度儲存,且保質期可能更長。一般來說,當需要將蛋白添加到細胞/組織培養物中或作為 ELISA 的標準品時,應購買含 BSA 的型式;但在某些情況下可能需要使用無載體蛋白,例如活體 (in vivo) 實驗、蛋白質標記或任何其他 BSA 可能干擾的實驗應用。
A
酸性重溶某些蛋白質非常重要,因有些蛋白質具有較高的等電點,導致此分子在中性 pH 條件下會呈現疏水性,如果不使用建議的緩衝液,細胞激素可能無法完全溶解,或殘留在移液管的吸頭、小管內和試管中等實驗室器皿表面。基於同樣的原因,我們也建議將等量分裝的蛋白儲存在重溶緩衝液中。可依實驗需要,將分裝後的蛋白用適當的緩衝液稀釋至工作濃度,此舉可以緩衝少量添加的酸,使其可以安全地添加於活細胞中。
A
一般普遍接受 1 個單位 (unit) 的定義為特定生物實驗分析中的 ED50 值,但不同的實驗條件會導致不同的 ED50 值。為了避免由此產生的問題,R&D Systems 刻意以質量 (mass) 而非單位來表示幾乎所有的蛋白質產品。如果發現有作者或其他廠牌將其「單位」與 WHO 標準單位或國際單位 (IU) 進行比較,可以在「單位換算表」 Unit Conversion Table 中找到換算資訊,此表格包含 R&D Systems 和 WHO 標準蛋白質的平行比較數據。
「單位換算表」
https://www.rndsystems.com/resources/technical-information/unit-conversion-table
 
A
請參考下面的化學耐受性表     
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A. LumiFlash™ Prime Chemiluminescent Substrate, HRP System (LF01)
適合:表現蛋白,量大好偵測的實驗。細菌表現蛋白,無論是SDS PAGE或是WB表現都是一大坨,訊號容易過曝或是燒片等

B. LumiFlash™ Ultima Chemiluminescent Substrate, HRP System (LF08)
適合:蛋白表現穩定。目標蛋白常態表現如同actin 、GAPDH,短暫曝光即可獲得明顯訊號,就算目標蛋白量少即使延長壓片時間仍可獲得清楚條帶

C. LumiFlash™ Infinity Chemiluminescent Substrate, HRP System (LF16)
適合:蛋白表現微量,需敏感度高的呈色劑。研究訊息傳遞路徑,部分蛋白表現量很少或是不穩定,需強效型的呈色劑並延長曝光時間來獲得最大訊號

D. LumiFlash™ Femto Chemiluminescent substrate, HRP System (LF24)
適合:極微量樣品。細胞加藥處理後,不確定目標蛋白是否表現,若有表現也是非常微量而且壓片時間要很久

通常細胞實驗推 Infinity,因為就算有些目標蛋白表現穩定,或是用細胞表現蛋白,覺得買 Ultima 即可,但應該也有其他蛋白的表現微量&需要高敏感度呈色劑的需求,所以通常推Infinity,除非實驗室有買不同靈敏度等級的ECL。
 
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Molecular Weight Cut-Off (MWCO) 截留分子量:定義上評定為通過膜後可保留 > 90% 以上已知分子量之球狀蛋白。大於定義的 MWCO 之分子被保留在樣品槽內,而小於 MWCO 分子量及溶液則會通過膜在濾液槽中。
為了最大量的保留樣品,一般建議濃縮離心管之孔徑以蛋白質的分子量除以 3 倍 (或 6) 計算,
假設樣品為 300 kDa,則可選擇 100 kDa 以下之濾膜。(300/3=100;300/6=50)。
選擇100 kDa 的濾膜有最大的流速,而選擇 50 kDa 的濾膜則有最大的蛋白質回收率。
 
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