FAQ常見問題

A
A. LumiFlash™ Prime Chemiluminescent Substrate, HRP System (LF01)
適合:表現蛋白,量大好偵測的實驗。細菌表現蛋白,無論是SDS PAGE或是WB表現都是一大坨,訊號容易過曝或是燒片等

B. LumiFlash™ Ultima Chemiluminescent Substrate, HRP System (LF08)
適合:蛋白表現穩定。目標蛋白常態表現如同actin 、GAPDH,短暫曝光即可獲得明顯訊號,就算目標蛋白量少即使延長壓片時間仍可獲得清楚條帶

C. LumiFlash™ Infinity Chemiluminescent Substrate, HRP System (LF16)
適合:蛋白表現微量,需敏感度高的呈色劑。研究訊息傳遞路徑,部分蛋白表現量很少或是不穩定,需強效型的呈色劑並延長曝光時間來獲得最大訊號

D. LumiFlash™ Femto Chemiluminescent substrate, HRP System (LF24)
適合:極微量樣品。細胞加藥處理後,不確定目標蛋白是否表現,若有表現也是非常微量而且壓片時間要很久

通常細胞實驗推 Infinity,因為就算有些目標蛋白表現穩定,或是用細胞表現蛋白,覺得買 Ultima 即可,但應該也有其他蛋白的表現微量&需要高敏感度呈色劑的需求,所以通常推Infinity,除非實驗室有買不同靈敏度等級的ECL。
 
A
Molecular Weight Cut-Off (MWCO) 截留分子量:定義上評定為通過膜後可保留 > 90% 以上已知分子量之球狀蛋白。大於定義的 MWCO 之分子被保留在樣品槽內,而小於 MWCO 分子量及溶液則會通過膜在濾液槽中。
為了最大量的保留樣品,一般建議濃縮離心管之孔徑以蛋白質的分子量除以 3 倍 (或 6) 計算,
假設樣品為 300 kDa,則可選擇 100 kDa 以下之濾膜。(300/3=100;300/6=50)。
選擇100 kDa 的濾膜有最大的流速,而選擇 50 kDa 的濾膜則有最大的蛋白質回收率。
 
A
單株抗體為同質性之抗體群,由漿性 B 細胞 (plasma B cells) 之單一個克隆 (clone) 所產生的,這些抗體會辨認且結合到抗原之抗原決定位 (epitope) 上。而多株抗體為異質性混合之抗體,由一群漿性 B 細胞 (plasma B cells) 克隆產生,會辨識相同抗原但結合到不同的抗原決定位。
A
重組單株抗體為藉由分子生物技術所產生之單株抗體 (monoclonal antibody),而非融合瘤 (hybridoma) 技術。換句話說,重組抗體產生可不使用動物 (animal-free),輕鏈 (light chains) 及重鏈 (heavy chains) 之特異性基因可被插入表現載體中,被引入宿主細胞中。宿主細胞產生抗體,而後被收集起來。重組抗體之優點為改進批次與批次間之穩定性及再現性,能夠放大至公克 (g) 等級,可高通量且無動物來源的生產。





 
A
因所有的免疫球蛋白都會非專一的結合到細胞表面上表現的Fc受體 (Fc receptors) 上。老鼠所產生的抗體,尤其是 isotype 為 IgG2a ,會強烈的結合到某些人類的白血球上。在流式細胞儀實驗 (偶爾在IHC實驗) 的步驟中,需併入同型對照組 (isotype control) 或陰性控制組 (negative control),去分析非專一性結合到目標細胞上的 Fc 受體的量有多少。
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