一抗的來源一般有經由融合瘤產生的小鼠來源的單株抗體 (Mouse monoclonal antibody)，或是免疫兔子得到血清來源的多株抗體 (Rabbit polyclonal antibody )，目前也有來自重組的兔子單株抗體 (Rabbit recombinant monoclonal antibody)，故一般很容易發生有相同物種來源的一抗，在遇到這問題時，要如何使相同物種來源的一抗作多重染色，以下有 5 種策略。每一個策略都是依序加入不同的一抗及二抗，來偵測不同抗原。 策略A： 針對不同的一抗，使用標定螢光之 Fab 片段二抗及標定不同螢光之整個 IgG 二抗分子來偵測 https://www.jacksonimmuno.com/technical/products/protocols/double-labeling-same-species-primary/example-a 策略B： 使用未標定螢光之 Fab 片段來辨認一抗，之後再使用偵測不同物種之 (標定螢光) 二抗來辨認 Fab 片段，藉此改變二抗的物種。 https://www.jacksonimmuno.com/technical/products/protocols/double-labeling-same-species-primary/example-b 策略C： 在第一個 (標定螢光的) 二抗作用後，使用 (與二抗相同物種之) 血清作用，藉此飽和此二抗的結合位；再使用與二抗相同物種之 Fab 片段來覆蓋二抗，避免第二個二抗與之作用。 https://www.jacksonimmuno.com/technical/products/protocols/double-labeling-same-species-primary/example-c 策略D： 使用未標定螢光及標定螢光之一抗作用時，先加入直接標定螢光的一抗後，使用 (未標定螢光) Fab 片段來遮蔽/阻斷第一支一抗的結合位。 https://www.jacksonimmuno.com/technical/products/protocols/double-labeling-same-species-primary/example-d 策略E： 還有另一個策略則不需使用 Fab片段，也是使用未標定螢光及標定螢光之一抗。在未標定螢光的一抗作用後，使用標定螢光的二抗偵測，再加入與一抗相同物種的正常血清，來阻斷二抗的結合位。另一支一抗則使用標定螢光直接辨認。 https://www.jacksonimmuno.com/technical/products/protocols/double-labeling-same-species-primary/example-e Fab二抗目錄